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Diagnóstico de las infecciones por el Virus de la Anemia Infecciosa de las Aves - Pruebas de laboratorio

Las pruebas de laboratorio para el diagnóstico de las infecciones por CAV se pueden dividir en aquellas para la determinación del antígeno y las otras para la determinación de anticuerpos.

Aislamiento viral

El aislamiento viral se lleva a cabo usualmente en huevos embrionados libres de patógenos específicos (SPF), luego de la inoculación en el saco de la yema.

También se puede intentar el aislamiento viral en cultivo de células MSCC-MSB1, una línea de células de linfoblastos establecida a partir de linfomas de la Enfermedad de Marek y Leucosis Linfoide. El crecimiento es lento y los títulos son bajos y se deben hacer por lo menos de 7 – 10 pasajes en subcultivos celulares para la determinación precisa final del título infectivo.
El virus puede ser aislado de diversos  órganos (hígado, timo, pulmón, corazón, Bolsa de Fabricio, músculos y médula ósea), pero el hígado y preparaciones del concentrado de linfocitos son las muestras de preferencia.

Detección del virus basándose en pruebas de ADN

PCR

La prueba de PCR (del inglés: reacción en cadena con polimerasa) utilizando “primers” específicos que reconocen el genoma del virus. El virus puede ser detectado en las mismas muestras tomadas utilizadas para el aislamiento viral.

Detección del antígeno

Prueba de inmunofluorescencia con conjugado de anticuerpos y fluoresceína, el cual se adhiere al virus en por ejemplo los cultivos infectados de células MDCC-MSB1 en caso de que el virus se encuentre presente.

Prueba de Inmunofluorescencia: Fotografía mostrando un cultivo de células MDCC-MSB1 infectado con el virus de la Anemia Infecciosa del pollo mostrando fluorescencia en los puntos en que el antígeno es detectado. En contraste la, la fotografía de abajo muestra una cultivo negativo.

Determinación de anticuerpos

Prueba de Virus neutralización (VN)

Se mezcla el suero de las aves con el virus de la Anemia Infecciosa – cultivado ya se en huevos embrionados o cultivo celular –. Se identifican los anticuerpos en el suero cuando se inhibe el crecimiento del virus. Generalmente se utiliza el método ß, utilizandose el virus a una concentración constante y haciéndose diluciones en base dos de los sueros sospechosos. Se calcula  el título basándose en la diluciones en serie efectuadas.

Prueba de Inmuno Ensayo Enzimático

(ELISA = del inglés "Enzyme linked Immuno Sorbent Assay”)

Se utiliza en Elisa competitivo. Los platos están cubiertos con un complejo de un anticuerpo monoclonal y el  virus. El complejo es detectado por una anti-γ-globulina marcada con una enzima. Después de la adicción de un substrato para la enzima se puede medir la reacción por la producción de un cambio de color. La prueba es una herramienta importante para confirmar la respuesta a infecciones de campo o controlar una respuesta adecuada de anticuerpos en el lote tras una vacunación. Para saber más sobre la prueba de Elisa y sus correlaciones con la prueba de VN presione aquí.